广州脑脊液外泌体蛋白检测

分离外泌体的方法之免疫亲和相互作用：免疫亲和法是利用外泌体表面蛋白（抗原）与其靶抗体或分离配体分子之间的免疫亲和相互作用原理分离纯外泌体的理想方法。它有助于根据其表面标志物分离特定类型的外泌体。基于微孔板的酶联免疫吸附测定（ELISA）是免疫亲和分离试剂盒的一个例子，用于根据外泌体表面标志物分离外泌体。Tetraspanin蛋白是这种分离方法的决定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫亲和外泌体分离中使用的抗体的常见示例。免疫亲和法可用于从结肠病细胞中分离外泌体，其效率高于超速离心和密度梯度分离。另外还有一种外泌体分离方法，该方法采用抗体包被的基于磁性颗粒的技术来分离外泌体。现有的外泌体分离方法可能存在样品丢失和样品污染的问题。广州脑脊液外泌体蛋白检测

差速离心法分离外泌体的实验原理：与等密度和梯度离心相反，差速离心从离心管内颗粒的均匀初始分布开始。在开始一轮离心过程中，位于管底部附近的一部分目标小颗粒不可避免地与较大颗粒共同沉淀。这种共沉淀导致较小颗粒的产量降低。然而，选择大颗粒，起初位于管半月板附近，在开始一轮离心过程中可能没有足够的时间到达管底，从而污染较后一个离心步骤产生的小颗粒颗粒。显然，交叉污染的程度取决于不同粒子群的相对沉降速度和离心条件。在被分离的粒子的沉降速度之间存在显着（数量级）差异的情况下，可以有效地优化差速离心协议以获得目标粒子群的高产量和足够纯度。此外，当不同颗粒部分之间的沉降速率只存在微小差异时，优化过程不太成功。在这些情况下，取决于离心条件。广州脑脊液外泌体蛋白检测外泌体在疙瘩微环境中的参与，反映了其具有的高度的异质性和复杂性。

细胞外泌体的来源和表征方法：细胞外泌体是直径为30-150nm的血管外囊泡亚群。在过去的20年里，科学家已经从包括正常细胞和病细胞在内的许多细胞类型中分离出外泌体，并且研究了它们对其他细胞的影响。外泌体是由多种大分子组成，例如核酸、蛋白质和脂质。细胞外泌体具有天然的特定细胞靶向特性，通常被设计用于靶向大分子（DNA和RNA）和药物递送系统（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用细胞外泌体的分离方法主要是超速离心法、密度梯度离心法、超滤分离法、基于聚合物的沉淀法、亲和沉淀分离法、免疫磁珠法和色谱法等。

外泌体分离方法之尺寸排阻色谱分离法：尺寸排阻色谱(SEC)用于根据尺寸而非分子量分离大分子。该技术应用了一种填充有多孔聚合物珠子的柱子，该珠子含有多个孔和隧道。分子根据它们的直径穿过珠子。小半径分子通过色谱柱的孔迁移需要更长的时间，而大分子从色谱柱中洗脱得较早。尺寸排阻色谱可以精确分离大分子和小分子。此外，该方法可以应用不同的洗脱溶液。与离心机离心方法相比，色谱分离具有较多的优势，因为通过色谱分离的外泌体不受剪切力的影响，避免了因剪切力所造成的囊泡结构改变。目前，SEC是一种普遍接受的分离血液和尿液中存在的外泌体的技术。此外，SEC方法与超滤相结合已用于分离和分析尿源性外泌体。此外，流场-流分馏结合紫外分析仪和光散射检测器已被应用于分析外泌体的大小和纯度。流场-流分馏结合抛物线和交叉流来分离外泌体。获得的外泌体已通过电子显微镜和质谱检测。外泌体分离器材的选择也对分离结果有一定的影响。

当外泌体在1983年头次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、疙瘩侵袭等方方面面。有研究表明疙瘩来源的外泌体参与到疙瘩细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了疙瘩的生长与侵袭。外泌体可作为一种新型的疙瘩治着策略，例如外泌体特异性LncRNA干扰RNA技术。东莞细胞外泌体报价表

超高速离心是常用的外泌体分离方法之一。广州脑脊液外泌体蛋白检测

外泌体分离方法之过滤法：超滤膜也可用于外泌体的分离。根据微泡的大小，使用超滤膜过滤的方法可以将外泌体与蛋白质和其他大分子分离。外泌体也可以通过多孔结构捕获它们来分离。常见的过滤膜孔径为0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体。比如微柱多孔硅纤毛结构一般用于分离40-100nm外泌体。在初始步骤中，去除较大的囊泡。在接下来的步骤中，外泌体会群集中在过滤膜上。隔离步骤相对较短，但该方法需要用PBS缓冲液对硅结构进行预孵育。除标准过滤技术外，切向流过滤在有效分离外泌体方面也有着尝试应用，通过切向流过滤技术去除游离肽和其他小化合物从而分离具有确定大小的外泌体。此外，在体外研究和脂肪组织中，也会采用超滤与SEC的结合的方式来分离外泌体。通过(a)对片上过滤器施加压力或(b)产生电场，迫使外泌体穿过多孔膜，结合错流和电泳分选来完成筛分。广州脑脊液外泌体蛋白检测

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