国产一体化倍性分析仪应用

实验仪器：Sysmex CyFlow® Ploidy Analyser 倍性分析仪（Sysmex Partec）试剂盒：CyStain® UV Precise P（Sysmex Partec）实验步骤：1、取新鲜待测植物叶片 0.5 平方厘米，置于培养皿中2. 取 Partec CyStain UV Precise P 裂解液 400ul 加于植物叶片周围，用刀片将叶片切碎，以充分提取出完整的细胞核，持续 30-60 秒3. 将培养皿中的液体用 30um 滤网过滤至样品管中4. 向样品管中加入 Partec CyStain UV Precise P 的 DAPI 染液 1600ul5. 上机（CyFiow Analyser倍性分析仪）检测。Analyser倍性分析仪产品优势：1、简单快速2、操作便捷3、用途范围广4、高精确性5、灵活便携。国产一体化倍性分析仪应用

流式细胞分析是一种现代分析技术，其在生物学和医学领域被范围广使用，具有“实验室的 CT”之称。虽然流式细胞术在植物研究中起步较晚，但由于它具有制样简单用量少、操作高效快速且数据重复性高等优势，已逐渐发展为一种常用的植物基因组大小或植物倍性研究方法。植物的核 DNA 含量和倍性水平是植物学研究中重要的基础研究指标。流式细胞术的应用，提高了植物核 DNA 含量检测的准确度和检测速度.流式细胞仪克服了传统鉴定方法操作难、时间长等不足，可进行快速、大量的染色体倍性分析，为后续棉花倍性育种提供技术支撑。进口高精确性倍性分析仪原理CyFlow Analyser倍性分析仪灵活便捷：结构紧凑，便于移动，适用于多种工作场所。

样品的新鲜程度直接影响实验的结果。由于次生代谢产物的影响，会导致信号峰过宽，甚至检测不到信号峰的情况。嫩叶的选择要选择新鲜、完全展开、无虫咬、无枯萎、分裂不活跃的部位。嫩叶的检测效果明显好于较老的叶片。倍性检测首先需要裂解液裂解细胞获得游离细胞核，然后用 DAPI 染液将细胞核染色体上的 A-T 碱基染色，再用倍性分析仪仪器检测细胞核里被染色的 A-T 碱基发出的荧光强度。比如二倍体的荧光强度是 100（横坐标），那么四倍体的荧光强度就是 200（横坐标），如下图所示，用 DAPI 染色法检测蚕豆的倍性。结果的纵坐标是细胞数量的显示，通常来说，信号峰高说明信号比较好，杂质少。

提取高质量的细胞核用于倍性检测至关重要，Peng 等比较了刀切法和研磨法提取棉花细胞核的效果，结果发现，刀切法提取的细胞核质量更高，因此我们选择刀切法来提取棉花细胞核。根据其他植物材料已有的研究报道，植物取材需要考虑样品易获性、细胞核型的稳定性和保存性等因素。如果材料选取不当，会导致提取的细胞核颗粒较少，生成大量的杂质，甚至形成变异系数较大的 DNA 峰。本研究以棉花的老叶和嫩叶为材料制备样品进行对比，结果表明棉花幼嫩叶片检测效果好，完全可以作为倍性鉴定试材。流式细胞仪具有制样简单用量少、操作高效快速且数据重复性高等优势。

Sysmex倍性分析仪是一种特殊的流式细胞仪。倍性分析与流式细胞术:流式细胞分析，又称流式细胞术（FCM），是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。其特点特点：（1）单细胞分析（2）快速分析（3）多参数相关测量（4）定量分析细胞（5）统计学意义明显CyFlow Analyser倍性分析仪可以高分辨率DNA和基因组大小分析。华南地区双螺旋生物仪器倍性分析仪染色速度

CyFlow Analyser倍性分析仪方便快捷，多功能性、高精确性、灵活便捷。国产一体化倍性分析仪应用

拟南芥是一种生长迅速的小型植物，可进行范围广的核内复制，在不发生有丝分裂的情况下进行基因组扩增。该物种含有有花植物中较小的基因组，约157Mb，C值为0.321pg。这些特征使得拟南芥特别适合作为测定基因组大小的内参，并且可以用于仪器线性度的质量控制。用于流式实验的植物样品通常只需少量植物组织。使用标准手术刀片将植物组织切碎并浸泡于缓冲液中，过滤含植物细胞核的匀浆以去除大的碎片，用DNA特异性荧光染料进行标记，然后在流式细胞仪上采集数据，根据每个细胞核的荧光强度来计算DNA含量。通过与已知标准品比较，可以用荧光强度换算出DNA含量的相对值。拟南芥通常用作内参，只需将内参样品和未知样品的细胞核同时进行分离、染色和分析即可。国产一体化倍性分析仪应用

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