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所有仪器的操作都基本一致。设置的时候包括反应板设置（plate setup）和程序设置（program setup）。我们以 ABI StepOne为例，详细看一下反应设置：A. 首先是实验目的选择：定量还是其他。我们命名为“BioTeke”，进行“定量”实验。B. 实验方法的选择：我们选用的比较Ct的SYBR Green方法， Fast程序，以cDNA为模板进行。C. 目的基因的设置：有几个目的基因和目的基因的名称。D. 样品的设置：包括哪个是实验组，哪个是对照组。以及负对照的设置和生物重复的设置。E. 对照组和内参基因的设置：这个是为后面的定量做准备F. 反应程序的设置：PCR反应程序的设置要根据不同公司的MasterMix。比如BioTeke的95℃ 2分钟就可以DNA聚合酶（ABI的需要10 分钟）。循环反应是95℃15秒，60℃15秒的40个循环。溶解曲线程序采用仪器默认设置就可以。或者是仪器说明书上建议的程序。G. 反应体系的设置：A-G这五个步骤简单设置好，可以保存，修改反应程序或者立刻进行反应。

SYBR Green I 是一种结合于所有双链DNA（dsDNA）双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。华南地区厂家qPCR仪价格

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实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。3.分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光。

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qPCR技术的本质是PCR技术，在扩增的每个循环中模板DNA通过变性、复性、延伸三个阶段形成更多数量的子代DNA，为下一个循环提供模板DNA。在每个循环结束后，仪器会激发荧光物质并检测一次荧光信号，那么每一个循环都会对应一个荧光信号值，将所有荧光信号值用光滑的曲线进行连接起来，便是 qPCR扩增曲线。如图所示，根据qPCR扩增曲线整体趋势，整个扩增过程主要分为四个时期，分别是基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。在基线期和平台期，荧光信号均维持水平状态，均不适用于对初始模板进行定量分析。在线性增长期，虽然扩增反应仍在进行，但随着反应产物的积累，PCR反应受到明显抑制导致扩增效率不断降低，此时产物不再以指数形式增长，同样不适用于定量分析初始模板量。q225 出色的热循环系统设计使得40 个循环的常规 qPCR 可以在短短43 分钟内轻松完成，让您的工作效率获得质提升 。湛江小巧qPCR仪采购

准确的温度控制与快速的变温系统是实现高效的 qPCR 实验的基础与关键。华南地区厂家qPCR仪价格

qPCR的实质就是PCR反应，只是在扩增产物上增加了荧光标记，通过仪器对荧光信号进行采集。荧光信号的强度与扩增得到的dsDNA的浓度成正比，因此非理想条件下的PCR荧光强度Rn=R0+YnRs＝RB+Y0(1+Ex)^nRs （Rn：第n次循环时荧光信号强度，R0：背景信号强度，Rs：每个分子的荧光强度），通过对采集荧光信号就能进行初始模板定量、基因表达量的研究。通过对PCR过程中荧光信号的实时监测，荧光强度的变化趋势，呈现出一条S型曲线即“扩增曲线（Amplication plot）”，分为四个时期：基线期、指数扩增期、线性增长期、平台期。华南地区厂家qPCR仪价格

广州双螺旋科学仪器有限公司是一家仪器仪表批发;商品批发贸易（许可审批类商品除外）;商品零售贸易（许可审批类商品除外）;教学设备的研究开发;办公设备耗材批发;生物技术开发服务;生物技术推广服务;计算机批发;生物技术转让服务;农业科学研究和试验发展;医学研究和试验发展;自然科学研究和试验发展;水处理设备的研究、开发;食品科学技术研究服务;环保设备批发;办公设备批发;的公司，是一家集研发、设计、生产和销售为一体的专业化公司。公司自创立以来，投身于数字PCR，纯水机，病理切片机，倍性分析仪，是精细化学品的主力军。双螺旋科学仪器致力于把技术上的创新展现成对用户产品上的贴心，为用户带来良好体验。双螺旋科学仪器创始人姜艳，始终关注客户，创新科技，竭诚为客户提供良好的服务。